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微生物計(jì)數(shù)的方式有哪些
更新時(shí)間:2022-05-05  |  點(diǎn)擊率:3987
  微生物的限度檢驗(yàn),定量微生物檢驗(yàn)方法,待檢的微生物在固體表面上生長,繁殖形成肉眼可見的菌落后,才能夠得到定量的數(shù)值。
  1.篩選菌株的原理
  選擇培養(yǎng)基:在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長,同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基,稱做選擇培養(yǎng)基。
  微生物的選擇培養(yǎng):在選擇培養(yǎng)基的配方中,把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源,只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長;把纖維素作為培養(yǎng)基中的唯一碳源,只有能夠利用纖維素的微生物才能夠生長;在無氮源的培養(yǎng)基上,只有自生固氮菌才能夠生長。
  選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例
  ①培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。
  ②培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。
  ③培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí),可以分離出固氮微生物,因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。
 ?、墚?dāng)培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí),也具有分離效果。如石油是唯一碳源時(shí),可以抑制不能利用石油的微生物的生長,而使能夠利用石油的微生物生存,得到能消除石油污染的微生物。
 ?、莞淖兾⑸锏呐囵B(yǎng)條件,也可以達(dá)到分離微生物的目的,如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。
  2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
  (1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(抽樣檢測法或血球板計(jì)數(shù)法)
  ①原理:利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。
 ?、诜椒ǎ河糜?jì)數(shù)板計(jì)算。
 ?、廴秉c(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌。
  (2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)
 ?、僭恚寒?dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌。
 ?、诓僮鳎?/div>
  a.設(shè)置重復(fù)組,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。
  b.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
  ③計(jì)算公式:每克樣品中的菌株數(shù)=圖片×M,其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數(shù)。注意:統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。
  3.實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)
  (1)設(shè)立重復(fù)組:統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時(shí),要至少涂布3個(gè)平板作重復(fù)組,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說服力與準(zhǔn)確性。
  (2)對照原則:
  對照實(shí)驗(yàn)是指除了被測試的條件以外,其他條件都相同的實(shí)驗(yàn),其作用是比照實(shí)驗(yàn)組,排除任何其他可能原因的干擾,證明確實(shí)是所測試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。
  設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。
  ①判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染,需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。
 ?、谂袛噙x擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用,需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng),觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目,進(jìn)行對比得出結(jié)論。
  (3)在微生物數(shù)量測定時(shí),應(yīng)選取具有合適的菌落數(shù)的培養(yǎng)基,如細(xì)菌、放線菌、酵母菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有30~300個(gè)菌落數(shù)為宜;霉菌以每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)有10~100個(gè)菌落數(shù)為宜。
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